色譜柱作為色譜儀的核心組件,其使用細節直接關系到分析結果的準確性、重現性和柱壽命。以下是關鍵使用細節的綜合分析:
安裝與初始活化
1. 系統適配性檢查:安裝前需全面檢查儀器氣路或液路系統的密閉性與清潔度。氣相色譜需重點關注載氣純度及通風安全;液相色譜則需確認流動相與柱內保存溶劑的兼容性,必要時通過過渡溶劑進行轉換。
2. 端部處理:色譜柱兩端需平整切割并配合合適的密封墊,確保無毛刺且密封良好,避免死體積或漏液。插入進樣口和檢測器時需嚴格遵循深度要求,防止柱效損失。
3. 老化與平衡:新柱必須經過老化以去除殘留雜質。氣相色譜需分段升溫至最高耐受溫度并監測基線穩定性;液相色譜則通過多次完整分析程序實現吸附飽和,尤其對大分子化合物需延長老化時間。
操作條件控制
1. 溫度與壓力管理:避免溫度和壓力劇烈波動,以免破壞柱床結構。液相色譜還需注意硅膠基質柱子的溫度上限。
2. 流動相與緩沖鹽使用:流動相應與固定相匹配,避免強腐蝕性溶劑。使用緩沖鹽時需充分過濾,事后沖洗以防析出結晶堵塞填料。反相色譜中溶劑比例變更應漸進,防止鍵合相塌陷。
3. 樣品前處理:所有樣品需經過濾或離心去除顆粒物,并優先采用固相萃取等方法凈化復雜基質。進樣前添加保護柱可有效攔截顆粒及化學污染物。
維護與保存
1. 定期清洗與再生:長期使用后可用強溶劑沖洗再生,但需注意方向與流速控制。若出現柱壓升高或峰形異常,可嘗試修剪柱頭填料恢復性能。
2. 保存策略:短期保存建議使用當前流動相(不含緩沖鹽);長期保存則選純甲醇或乙腈,離子交換柱等特殊類型可加入抑菌劑。保存時需密封并標注溶劑信息,避免光照和干燥。
特殊場景處理
1. 緩沖鹽析出補救:發生析出時可采用甲醇/水混合溶液反向沖洗,結合升溫加速溶解。
2. pH范圍控制:硅膠基質色譜柱需嚴格控制流動相pH值,特殊條件下可選用雜化硅膠或采取預柱保護措施。
色譜柱的使用需貫穿嚴謹的操作規范和維護策略。從安裝到日常分析,每個環節的細節把控均會影響柱效能和使用壽命。